Ποια είναι η καλύτερη μέθοδος;
—Δοκιμές για τη διάγνωση λοίμωξης SARS-CoV-2
Για επιβεβαιωμένες περιπτώσεις COVID-19, τα κοινά κλινικά συμπτώματα που αναφέρθηκαν περιλαμβάνουν πυρετό, βήχα, μυαλγία ή κόπωση.Ωστόσο, αυτά τα συμπτώματα δεν είναι μοναδικά χαρακτηριστικά του COVID-19, επειδή αυτά τα συμπτώματα είναι παρόμοια με αυτά άλλων νόσων που έχουν μολυνθεί από ιούς, όπως η γρίπη.Επί του παρόντος, το νουκλεϊκό οξύ του ιού σε πραγματικό χρόνο PCR (rt-PCR), η απεικόνιση CT και ορισμένες αιματολογικές παράμετροι είναι τα κύρια εργαλεία για την κλινική διάγνωση της λοίμωξης.Πολλά εργαστηριακά κιτ δοκιμών έχουν αναπτυχθεί και χρησιμοποιηθεί για τη δοκιμή δειγμάτων ασθενών για COVID-19 από το κινεζικό CDC1, CDC των ΗΠΑ2και άλλες ιδιωτικές εταιρείες.Η δοκιμή αντισωμάτων IgG/IgM, μια ορολογική μέθοδος δοκιμής, προστέθηκε επίσης ως διαγνωστικό κριτήριο στην ενημερωμένη έκδοση των οδηγιών διάγνωσης και θεραπείας για τη νέα νόσο του κοροναϊού (COVID-19) της Κίνας, η οποία εκδόθηκε στις 3 Μαρτίου.1.Η δοκιμή rt-PCR νουκλεϊκού οξέος ιού εξακολουθεί να είναι η τρέχουσα τυπική διαγνωστική μέθοδος για τη διάγνωση του COVID-19.
StrongStep®Νέο Κιτ Coronavlrus (SARS-COV-2) Multiplex σε πραγματικό χρόνο PCR (ανίχνευση τριών γονιδίων)
Ωστόσο, αυτά τα κιτ δοκιμών PCR σε πραγματικό χρόνο, που αναζητούν γενετικό υλικό του ιού, για παράδειγμα σε ρινικά, στοματικά ή πρωκτικά επιχρίσματα, υποφέρουν από πολλούς περιορισμούς:
1) Αυτές οι δοκιμές έχουν μεγάλους χρόνους ολοκλήρωσης και είναι πολύπλοκες στη λειτουργία τους.γενικά χρειάζονται κατά μέσο όρο πάνω από 2 έως 3 ώρες για να δημιουργήσουν αποτελέσματα.
2) Οι δοκιμές PCR απαιτούν πιστοποιημένα εργαστήρια, ακριβό εξοπλισμό και εκπαιδευμένους τεχνικούς για να λειτουργήσουν.
3) Υπάρχουν ορισμένοι αριθμοί ψευδώς αρνητικών για την rt-PCR του COVID-19.Μπορεί να οφείλεται σε χαμηλό ιικό φορτίο SARS-CoV-2 στο δείγμα επιχρίσματος του ανώτερου αναπνευστικού (ο νέος κορωνοϊός μολύνει κυρίως την κατώτερη αναπνευστική οδό, όπως οι πνευμονικές κυψελίδες) και το τεστ δεν μπορεί να εντοπίσει άτομα που πέρασαν από λοίμωξη, ανάρρωσαν και καθάρισε τον ιό από το σώμα τους.
Έρευνα των Lirong Zou et al4διαπιστώθηκε ότι υψηλότερα ιικά φορτία ανιχνεύθηκαν αμέσως μετά την έναρξη των συμπτωμάτων, με υψηλότερα ιικά φορτία να ανιχνεύονται στη μύτη παρά στο λαιμό και το μοτίβο απόρριψης του ιικού νουκλεϊκού οξέος των ασθενών που έχουν μολυνθεί από SARS-CoV-2 μοιάζει με αυτό των ασθενών με γρίπη4και φαίνεται διαφορετικό από αυτό που παρατηρείται σε ασθενείς που έχουν μολυνθεί με SARS-CoV-2.
Οι Yang Pan et al5εξέτασε σειριακά δείγματα (επιχρίσματα λαιμού, πτυέλων, ούρων και κοπράνων) από δύο ασθενείς στο Πεκίνο και διαπίστωσε ότι τα ιικά φορτία σε δείγματα λαιμού και πτυέλων κορυφώθηκαν περίπου 5-6 ημέρες μετά την έναρξη των συμπτωμάτων, τα δείγματα πτυέλων γενικά έδειξαν υψηλότερα ιικά φορτία από δείγματα επιχρίσματος λαιμού.Δεν ανιχνεύθηκε ιικό RNA σε δείγματα ούρων ή κοπράνων από αυτούς τους δύο ασθενείς.
Το τεστ PCR δίνει θετικό αποτέλεσμα μόνο όταν ο ιός είναι ακόμα παρών.Τα τεστ δεν μπορούν να προσδιορίσουν άτομα που πέρασαν από μόλυνση, ανάρρωσαν και καθάρισαν τον ιό από το σώμα τους.Στην πραγματικότητα, μόνο περίπου το 30%-50% ήταν θετικό για PCR σε ασθενείς με κλινικά διαγνωσμένη νέα πνευμονία κοροναϊού.Πολλοί νέοι ασθενείς με πνευμονία κορωνοϊού δεν μπορούν να διαγνωστούν λόγω αρνητικού τεστ νουκλεϊκού οξέος, επομένως δεν μπορούν να λάβουν έγκαιρα την αντίστοιχη θεραπεία.Από την πρώτη έως την έκτη έκδοση των κατευθυντήριων γραμμών, βασιζόμενη αποκλειστικά στη διάγνωση των αποτελεσμάτων των δοκιμών νουκλεϊκού οξέος, τα οποία προκάλεσαν μεγάλο πρόβλημα στους κλινικούς ιατρούς. Ο πρώτος «σφυρίχτρας», Δρ. Li Wenliang, οφθαλμίατρος στο Wuhan Central Νοσοκομείο, είναι νεκρός.Κατά τη διάρκεια της ζωής του, έκανε τρεις εξετάσεις νουκλεϊκού οξέος σε περίπτωση πυρετού και βήχα και την τελευταία φορά έλαβε θετικά αποτελέσματα PCR.
Μετά από συζήτηση από ειδικούς, αποφασίστηκε να αυξηθούν οι μέθοδοι εξέτασης ορού ως νέο διαγνωστικό κριτήριο.Ενώ οι δοκιμές αντισωμάτων, που ονομάζονται επίσης ορολογικές δοκιμές, μπορούν να επιβεβαιώσουν εάν κάποιος είχε μολυνθεί ακόμη και αφού το ανοσοποιητικό του σύστημα έχει καθαρίσει τον ιό που προκαλεί το COVID-19.
Ταχεία δοκιμή αντισωμάτων StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM
Η δοκιμή αντισωμάτων IgG/IgM θα βοηθήσει στον εντοπισμό με πολύ πιο πληθυσμιακό τρόπο ποιος είχε τη λοίμωξη, επειδή πολλές περιπτώσεις φαίνεται να μεταδίδονται από ασυμπτωματικούς ασθενείς που δεν μπορούν να εντοπιστούν εύκολα.Ένα ζευγάρι στη Σιγκαπούρη, ο σύζυγος βγήκε θετικός με PCR, το αποτέλεσμα του τεστ PCR της συζύγου του ήταν αρνητικό, αλλά τα αποτελέσματα του τεστ αντισωμάτων έδειξαν ότι είχε αντισώματα, όπως και ο σύζυγός της.
Οι ορολογικές δοκιμασίες πρέπει να επικυρωθούν προσεκτικά για να βεβαιωθείτε ότι αντιδρούν αξιόπιστα, αλλά μόνο στα αντισώματα κατά του νέου ιού.Μια ανησυχία ήταν ότι η ομοιότητα μεταξύ των ιών που προκαλούν σοβαρό οξύ αναπνευστικό σύνδρομο και του COVID-19 θα μπορούσε να οδηγήσει σε διασταυρούμενη αντίδραση.Το IgG-IgM που αναπτύχθηκε από τον Xue Feng wang6θεωρήθηκε ότι μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δοκιμή σημείου φροντίδας (POCT), καθώς μπορεί να πραγματοποιηθεί κοντά στο κρεβάτι με αίμα από το δάχτυλο.Το κιτ έχει ευαισθησία 88,66% και ειδικότητα 90,63%.Ωστόσο, εξακολουθούσαν να υπάρχουν ψευδώς θετικά και ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα.
Στην ενημερωμένη έκδοση της Κίνας της κατευθυντήριας γραμμής διάγνωσης και θεραπείας για τη νέα νόσο του κοροναϊού (COVID-19)1, τα επιβεβαιωμένα κρούσματα ορίζονται ως ύποπτα κρούσματα που πληρούν οποιοδήποτε από τα ακόλουθα κριτήρια:
(1) Δείγματα αναπνευστικής οδού, δείγματα αίματος ή κοπράνων που εξετάστηκαν θετικά για νουκλεϊκό οξύ SARS-CoV-2 χρησιμοποιώντας rt-PCR.
(2) Η γενετική αλληλουχία του ιού από δείγματα αναπνευστικής οδού, αίματος ή κοπράνων είναι εξαιρετικά ομόλογη με τον γνωστό SARS-CoV-2.
(3) Το αντίσωμα IgM και το αντίσωμα IgG που είναι ειδικά για τον νέο κορωνοϊό στον ορό ήταν θετικά.
(4)Το νέο ειδικό για τον κοροναϊό αντίσωμα IgG ορού που άλλαξε από αρνητικό σε θετικό ή το ειδικό για τον κοροναϊό αντίσωμα IgG κατά την περίοδο ανάρρωσης είναι 4 φορές υψηλότερο από αυτό κατά την οξεία περίοδο.
Διάγνωση και θεραπεία του COVID-19
| Κατευθυντήριες γραμμές | Δημοσιεύτηκε | Επιβεβαιωμένα διαγνωστικά κριτήρια |
| Έκδοση 7η | 3 Μαρ. 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Έκδοση 6η | 18 Φεβ.2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Αναφορά
1. Οδηγίες για τη διάγνωση και τη θεραπεία της πνευμονίας του νέου κοροναϊού (δοκιμαστική έκδοση 7, Εθνική Επιτροπή Υγείας της Λαϊκής Δημοκρατίας της Κίνας, που εκδόθηκε στις 3 Μαρτίου 2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Έρευνα Χρησιμοποιήστε μόνο το πρωτόκολλο RT-PCR σε πραγματικό χρόνο για την ταυτοποίηση του 2019-nCoV
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Η Σιγκαπούρη ισχυρίζεται ότι χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά τεστ αντισωμάτων για την παρακολούθηση λοιμώξεων από κορωνοϊό
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. Ιικό Φορτίο SARS-CoV-2 σε δείγματα του ανώτερου αναπνευστικού συστήματος μολυσμένων ασθενών 19 Φεβρουαρίου 2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Ιικό φορτίο SARS-CoV-2 σε κλινικά δείγματα Lancet Infect Dis 2020 Δημοσιεύτηκε στο Διαδίκτυο στις 24 Φεβρουαρίου 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Ανάπτυξη και κλινική εφαρμογή μιας ταχείας δοκιμής συνδυασμένου αντισώματος IgM-IgG για SARS-CoV-2
Διάγνωση μόλυνσης XueFeng Wang ORCID ID: 0000-0001-8854-275X
Ώρα δημοσίευσης: Μαρ-17-2020
